進(jìn)口熒光顯微鏡是以紫外線為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,就是對這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
進(jìn)口熒光顯微鏡技術(shù)包括免疫熒光技術(shù)和熒光素直接標(biāo)記技術(shù)。例如,將標(biāo)記熒光素的純化肌動蛋白顯微注射入培養(yǎng)細(xì)胞中,可以看到肌動蛋白分子組裝成肌動蛋白纖維。可將產(chǎn)生熒光的綠色熒光蛋白基因與某種蛋白質(zhì)基因融合,在表達(dá)這種融合蛋白的細(xì)胞中,便可直接在活體狀態(tài)下觀察到該蛋白在活細(xì)胞內(nèi)的動態(tài)變化。不同熒光素的激發(fā)波長范圍不同,所以同一樣品可以用兩種以上的熒光素標(biāo)記,同時顯示不同成分在細(xì)胞中的定位。
進(jìn)口熒光顯微鏡檢術(shù)一般分為透射和落射式兩種類型。
(1)透射式:激起光來自被檢物體的下方,聚光鏡為暗視界聚光鏡,使激起光不進(jìn)入物鏡,而使熒光進(jìn)入物鏡。它在低倍情況下亮堂,而高倍則暗,在油浸物鏡下較難操作,尤以低倍的照明規(guī)模難于確認(rèn),但能得到很暗的視界背景。透射式不適用于非透明的被檢物體。
(2)落射式:透射式目前簡直被淘汰,新型的進(jìn)口熒光顯微鏡多為落射式,光源來自被檢物體的上方,在光路中具有分光鏡,所以對透明和不透明的被檢物體都適用。因為物鏡起了聚光鏡的效果,不只便于操作,并且從低倍到高倍,可以實現(xiàn)整個視場的均勻照明。